Імуноферментний аналіз (ELISA)
Імуноферментний аналіз (ІФА, ELISA) або, точніше, ферментний імуносорбентний аналіз (англ. enzyme-linked immuno sorbent assay, ELISA) — імунологічний метод для визначення наявності певних антигенів, шляхом реакції антиген-антитіло. Широко використовується в науково-дослідній роботі та клінічній лабораторній діагностиці. Вперше був описаний у 1971 році.[1]
| ELISA | |
|---|---|
 Мікротитрувальна плашка на 96 лунок, що застосовується для проведення ELISA. | |
| MeSH | D004797 |
Загальний принцип ELISA ред.
Основний принцип ELISA — реакція антиген-антитіло. Якщо антиген (молекула-мішень) являє собою білок, то його очищений препарат звичайно використають для одержання антитіл, за допомогою яких потім і виявляють дану мішень. Раніше використовувались первинні антитіла, що були за своєю природою поліклональними. Розробка і застосування моноклональних антитіл дало змогу значно покращити специфічність імуноферментного аналізу.
Процедура ред.
Існує цілий ряд підходів, що дозволяють визначити, чи відбулося зв'язування антитіла з антигеном-мішенню. Один з них — це ферментний іммуносорбентний аналіз (ELISA), що часто використовується для діагностики різноманітних антигенів.
- Підготовка підкладки для фіксації досліджуваного зразка;
- Зразок, у якому хочуть виявити специфічну молекулу або мікроорганізм, фіксують на твердій підкладці, наприклад на пластиковій мікротитрувальній плашці, що зазвичай має 96 лунок;
- До фіксованого зразка додають антитіло, специфічне до маркерної молекули (первинне антитіло), потім промивають лунку, щоб видалити молекули первинного антитіла, які не зв'язалися;
- Додають вторинне антитіло, що специфічно зв'язується з первинним і не взаємодіє з маркерною молекулою. До цього антитіла приєднаний фермент (наприклад, лужна фосфатаза, пероксидаза або уреаза), що може каталізувати перетворення незабарвленого субстрату в забарвлений продукт. Промивають лунку, щоб видалити молекули, які не зв'язалися;
- Додають незабарвлений субстрат, що впізнається та утилізується ферментом;
- Проводять якісне або кількісне визначення пофарбованого продукту, за допомогою оцінки оптичної щільності.
Застосування ред.
Ферментний імуносорбентний аналіз широко застосовується для діагностики різноманітних інфекційних захворювань, ракових процесів (в основному завдяки специфічним білкам і пептидам), визначення концентрації різноманітних низькомолекулярних сполук, таких як токсини, лікарські засоби тощо.
Застосування під час коронавірусної пандемії 2020 ред.
У 2020 році було запропоновано проводити тести, щоб визначити наявність антитіл до коронавірусу SARS-CoV-2.
В Україні тести ІФА-тести було завезено в кінці квітня 2020 року.[2] 5 травня міністр охорони здоров'я Максим Степанов скликав нараду, на якій збираються вирішити як і кого тестувати такими тестами в Україні.[3]
Джерела ред.
- Б. Глік, Дж. Пастернак, Молекулярна біотехнологія, Москва, Мир, 2002.(С.?)
Примітки ред.
- ↑ Engvall, E (22 листопада 1972). Enzyme-linked immunosorbent assay, Elisa. The Journal of Immunology. 109 (1): 129—135. ISSN 0022-1767. PMID 4113792. Архів оригіналу за 5 серпня 2020. Процитовано 13 червня 2020.
- ↑ Перші тестування на антитіла до COVID-19 будуть проведені в Одеській і Сумській областях [Архівовано 24 лютого 2022 у Wayback Machine.], Рубрика, 28 квітня 2020
- ↑ МОЗ ще думає як використовувати ІФА-тести, в регіони нічого не розподілялося, - міністр, Рубрика, 4 травня 2020
Посилання ред.
- ІМУНОФЕРМЕНТНИЙ АНАЛІЗ [Архівовано 3 серпня 2016 у Wayback Machine.] //Фармацевтична енциклопедія
- Анімована ілюстрація проходження аналізу
- Анімоване навчання [Архівовано 12 жовтня 2007 у Wayback Machine.]
- ELISA протокол
- Про ELISA [Архівовано 13 березня 2012 у Wayback Machine.]
|
Це незавершена стаття з медицини. Ви можете допомогти проєкту, виправивши або дописавши її. |