Молекулярне клонування: відмінності між версіями

 

Часто для дослідження еукаріотичних генів береться не геномна ДНК, а інформаційна РНК, на матриці якої за допомогою [[ПЛР зі зворотньою транскрипцією]] утворюється [[комплементарна ДНК]] (кДНК), тобто послідовність еукаріотичного гену, в якому відсутні інтрони. Це дозволяє зменшити довжину клонованої послідовності без зміни при подальшій експресії у первинній структурі білка. Процедура виділення тотальної РНК загалом подібна до виділення ДНК, однак має певні особливості.<ref name="M. S. Box 2011">{{cite journal

|coauthors=M. S. Box, V. Coustham,3, C. Dean, J. S. Mylne1

|year=2011

|pages=

|doi=10.1186/1746-4811-7-7

}}</ref> Так, якщо ДНК представлена в клітинах в рівній мірі, то наявність і рівень експресії конкретної РНК, як правило, варіює в різних органах і тканинах. Другою особливістю є малий час існування мРНК: бактеріальна мРНК дуже нестабільна, період напіврозпаду - кілька хвилин; період напіврозпаду еукаріотичної мРНК вимірюється годинами і добами.<ref name="ОВЧИННИКОВ 2009">{{cite journal

|coauthors=

|year=2009

|volume=

|pages=

}}</ref>

 

<ref name="Ai-Sheng Xiong 2006">{{cite journal

|author=Ai-Sheng Xiong

|year=2006

|url=http://www.nature.com/nprot/journal/v1/n2/full/nprot.2006.103.html

|journal=Nature Protocols

|pages=791 - 797

|doi=10.1038/nprot.2006.103

}}</ref>

вдається синтезувати ланцюги довжиною до 40 кілобаз. Проте, це менше, ніж довжина багатьох еукаріотичних генів. По-друге, оскільки при ПЛР потрібне специфічне спарювання праймерів з ланцюгом ДНК, для ампліфікації необхідно знати послідовність гену. Тому для отримання нових генів ПЛР не може застосовуватись.

 

== Зовнішні посилання ==

{{mol_bio-stub}}

[[Категорія:Молекулярно-біологічні методи]]