Імуноферментний аналіз (ELISA): відмінності між версіями

[перевірена версія][перевірена версія]
Вилучено вміст Додано вміст
доповнення
доповнення
Рядок 1:
{{Otheruses|ІФА (значення)}}
'''Імуноферментний аналіз (ІФА, ELISA)''' або, точніше, '''ферментний імуносорбентний аналіз''' ({{lang-en|enzyme-linked immuno sorbent assay, ELISA}}) — імунологічний метод для визначення наявності певних [[антиген]]ів, що заснований на ідентифікації комплексів [[антиген]]-[[антитіло]]. Широко використовується в лабораторній діагностиці.
== Загальний принцип ELISA ==
Основний принцип ELISA — специфічнереакція зв'язування першого антитіла з мішеннюантиген-антитіло. Якщо антиген (молекула-мішень) являє собою білок, то його очищений препарат звичайно використають для одержання антитіл, за допомогою яких потім і виявляють дану мішень. Раніше використовувались першіпервинні антитіла, що були за своєю природою [[поліклональні антитіла|поліклональними]]. Розробка і застосування [[моноклональні антитіла|моноклональних антитіл]] дало змогу значно покращити специфічність імуноферментного аналізу.
 
== Процедура ==
Існує цілий ряд підходів, що дозволяють визначити, чи відбулося зв'язування [[антитіло|антитіла]] з [[антиген]]ом-мішенню. Один з них — це ферментний іммуносорбентний аналіз (ELISA), що часто використовується для діагностики різноманітних антигенів.
Процедура аналізу включає такі етапи:
[[Файл:ELISA-sandwich.svg|thumb|400px|Схема проведення аналізу]]
# Підготовка підкладки для фіксації досліджуваного зразка;
# Зразок, у якому хочуть виявити специфічну молекулу або мікроорганізм, фіксують на твердій підкладці, наприклад на пластиковій мікротитрувальній плашці, що зазвичай має 96 лунок;
# До фіксованого зразка додають антитіло, специфічне до маркерної молекули (першепервинне антитіло), потім промивають лунку, щоб видалити молекули першогопервинного антитіла, які не зв'язалися;
# Додають другевторинне антитіло, що специфічно зв'язується з першимпервинним антитілом і не взаємодіє з маркерною молекулою. До цього антитіла приєднаний [[фермент]] (наприклад, лужна [[фосфатаза]], [[пероксидаза]] або [[уреаза]]), що може каталізувати перетворення незабарвленого [[субстрат]]у в забарвлений продукт. Промивають лунку, щоб видалити молекули, які не зв'язалися;
# Додають незабарвлений субстрат, що впізнається та утилізується ферментом;
# Проводять якісне або кількісне визначення пофарбованого продукту.
Основний принцип ELISA — специфічне зв'язування першого антитіла з мішенню. Якщо молекула-мішень являє собою білок, то його очищений препарат звичайно використають для одержання антитіл, за допомогою яких потім і виявляють дану мішень. Раніше використовувались перші антитіла, що були за своєю природою [[поліклональні антитіла|поліклональними]]. Розробка і застосування [[моноклональні антитіла|моноклональних антитіл]] дало змогу значно покращити специфічність імуноферментного аналізу.
 
== Застосування ==